Division 1 var den näst högsta serien i amerikansk fotboll för herrar i Sverige 2000. Serien var uppdelad på fyra olika geografiska serier. Vinst gav 2 poäng, oavgjort 1 poäng och förlust 0 poäng.
De två bästa lagen i varje serie gick vidare till Division 1 slutspel.
Division 1 Norra spelades i en A- och en B-grupp där lagen mötes i dubbelmöten inom grupperna och enkelmöten mellan grupperna.[1]
Division 1 Östra spelades i en A- och en B-grupp där lagen mötes i dubbelmöten inom grupperna och enkelmöten mellan grupperna.
Division 1 Västra spelades i en A- och en B-grupp där lagen mötes i dubbelmöten inom grupperna och enkelmöten mellan grupperna.
Division 1 Södra spelades i en A- och en B-grupp där lagen mötes i dubbelmöten inom grupperna och enkelmöten mellan grupperna.